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                熒光分光光度法◆在食品中維生素C含量㊣測定上的應用↘

                日期: 2017-08-10
                瀏覽次數: 1364
                案例名稱: 熒光分光光度法在食①品中維生素C含量測定上的應用

                摘要:?熒光分光光度法是對熒光物質進〒行定性和定量的☆有效方法。目前國家〓標準對於測定食品中維生素C含量的方法以熒光分光光度法為主。

                本文以嬰幼兒乳品為︽例,依據國家標▓準GB 5413.18-2010《食品安全國家標準 嬰幼兒食品和乳品中維生』素C的測定》,應用港東F-380型熒光分光◣光度計對嬰幼兒乳品中維生素C的含量進行測ω 定。結果證明此方法操作簡便,線性良好是測定食品中維生素C含量的理想方法。?

                關鍵詞: ?熒光分光光度法 ?維生素C ?抗壞血酸 ?食品 ?嬰幼兒乳品


                點擊查看相關產品:F-380熒光分光光度計

                ?


                · 原理

                維生素C(抗壞血酸)在活性炭╳存在下氧化成脫氫抗壞血酸,它與鄰苯二胺(OPDA)反應生成熒光物質(喹唔啉),用熒光分光光度計測定其熒光強度,其熒光強度與▃維生素C的濃度成正比。

                脫氫抗壞血酸與硼酸可形成復合物不與鄰苯二胺反應,以此◥排除試樣中熒光雜質產生的幹擾。

                ??

                ·?實驗條件

                儀器及附件:

                幸运快3 F-380 型熒光分光光度計

                熒光石英比色皿

                分析條件:

                激發波長:350nm

                發射波長:430nm

                藥品:

                澱粉酶、偏磷酸、乙酸、活性炭、鹽酸、亞鐵氰化鉀、結晶乙酸鈉、硼酸、鄰苯二胺、維生素C標準品。

                其它:

                分析天平(0.0001g)、烤箱、水浴鍋、80~200目篩子、研缽、抽濾裝置、稱量紙、藥勺、量筒、容量瓶、具塞三角瓶、漏鬥、濾紙、移液管、具塞比色管、燒杯、擦鏡

                紙、玻璃棒、膠頭滴管】等。

                ? ?

                ·?實驗流程


                熒光︻分光光度法在食品中維生素⌒C含量測定上的應用


                樣品前∑處理:

                樣品前處理步驟如下圖所示:

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                熒光分光光度法在食品中維生素C含量測定上的應用

                圖1 ?樣品前處理流程圖

                備註:樣品稱樣量︽依據其本身維生素C含量(約2mg)而定。澱粉酶活力為1.5U/mg,根據活力單位大小調節用量。


                樣品待測液制備:

                樣品經前處理後還需進行進一步的處理才可以上機進行檢測。

                樣品待測液制備步驟如下圖所示:

                ?

                熒光分光光度法在食品中維生素C含量測定上的應用

                圖2 ?樣品空白溶液◣待測液和樣品溶液待測液配制流程圖

                備註:樣品稱樣量依據其本身維生素C含量(約2mg)而定。澱粉酶活力為1.5U/mg,根據活力單位大小調節用量。


                標準樣☉品待測液制備:

                精密稱取0.050g維生素C標準品,用偏磷酸-乙酸溶液A溶解並定容●至50mL,再準確吸取10.0mL該溶液用偏磷酸-乙酸溶液A稀釋並定容至100mL,配制成100μg/mL的⊙標準溶液。

                準確吸取◤經過處理的VC標準溶液(10μg/mL)0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL分別置於10mL試管中,補水至2.0mL,配制成VC標準樣品工作液。再分別加入5mL鄰苯二胺(OPDA)溶液,搖勻避光靜置60min,即配制成VC標準樣品待測液。

                標準樣品待測ζ液制備步驟如下圖所示:

                熒光分光光度法在食品中維生素C含量測定上的應用

                圖3 ?VC標準空白溶液待測液和VC標準系列溶液待測液配制流程圖


                ·?測定結果

                熒光分光光度法在食品中維生素C含量測定上的應用

                熒光分光光度法在食品中維生素C含量測定上的應用

                式中:

                X——試樣中維生素C的含量,單位為〇毫克每百克(mg/100g);

                V——試樣的定容◤體積≡,單位為毫升(mL);

                c——由標準曲線查得的試樣測定液中維生素C的質量↓濃度,單位為微克每毫升(μg/mL);

                m——試樣的質量,單位為克(g);

                f——試樣稀釋倍數。

                ?

                ·?結論

                采用熒︾光分光光度法測定食品中維生素C含量,操作簡單,方法準確,是一種理想的方法。

                由於維生素C本身易光解而且在測定過程中需要對每一種樣品進行樣品的背景扣除,因此,此實驗對儀器的功能要求更高。港東F-380型熒光分光光度計率先在硬件上采用了激發側擋光快門的設置,從而避免了樣品被強光的直接照射;軟件上采用了獨特的雙背景扣除功能,自動計算維生素C濃度,使整個實驗操作簡便,結果重現性良好。



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